بررسی اثر مهارکننده های جدید بر روی آنزیم آمین اکسیداز نخود

آمین اکسیدازها متعلق به فوق خانواده ی آنزیم های اکسیدوردکتاز بوده و به طور گسترده ای در باکتری ها، قارچ ها، گیاهان و پستانداران توزیع دارند که بر اساس نوع گروه پروستتیک به دو دسته تقسیم می شوند: 1)آمین اکسیدازهای دارای فلاوین آدنین دی نوکلئوتید 2) آمین اکسیدازهای دارای مولکول مس (ii) و2و4و5-تری هیدروکسی فنیل آلانین کینون. آمین اکسیدازهای گیاهی به میزان زیادی در دولپه ای ها، به ویژه در جوانه های نخود ، نخود فرنگی، عدس و سویا بیان می شوند، و ضمن بیوکاتالیز دآمیناسیون اکسیداتیو آمین-های نوع اول، منجر به تولید آلدئیدهای مختلف،آمونیاک و پراکسیدهیدروژن می شود. در این تحقیق برای تخلیص آمین اکسیداز جوانه های نخود بعد از ترسیب آنزیم با آمونیوم سولفات و انجام دیالیز، از ستون deae-سلولز استفاده شد نتایج الکتروفورز به همراه بررسی فعالیت آنزیمی از تخلیص نسبتاً مناسب آنزیم با روش مذکور بوده است. پس از تخلیص پارامترهای سینتیکی km و vmax (با استفاده از اکسیداسیون گایاکول در حضور پراکسیدهیدروژن و پراکسیداز و پوترسین دی هیدروکلراید به عنوان سوبسترا) با تحلیل نمودار لینور-برک و به ترتیب برابر باmm 3/3 و mmol/min/mg 95/0 تعیین گردید. در مرحله بعد بررسی جهت انتخاب مهارکننده های مختلف احتمالی انجام گردید. نتایج بررسی های سنتیکی حاکی از خاصیت مهارکنندگی آنزیمی قابل ملاحظه ویتامین ب هیدروکلراید، تترااتیلن پنتاآمین و دی اتیلن تری آمین پنتا-استیک از بین ترکیبات مورد بررسی بود، به عبارت دیگر ویتامین ب-هیدروکلراید با mm8 ki=باعث مهار رقابتی آمین اکسیداز نخود شده و تترااتیلن پنتاآمین و دی اتیلن تری آمین پنتا استیک به ترتیب با ki برابر با 1/0 و 78 میلی مولار با روش خطی مخلوط باعث مهار آنزیم می شوند. همچنین استیلاسیون پوترسین دی هیدروکلراید توسط استیک انهیدرید منجر به سنتز آنالوگ جدیدی از سوبسترای مذکور (ان-استیل-پوترسین دی هیدروکلراید) گردید و پس از تخلیص توسط روش های طیف سنجی مادون قرمز تبدیل فوریه و جرمی ساختار آن تایید شد. بررسی سنتیکی اثر ترکیب جدید بر آنزیم آمین اکسیداز نخود، مهارکنندگی از نوع وابسته به مکانیسم کاتالیز، با ki برابر با 25/49 میلی مولاراز خود نشان داد.